1.簡(jiǎn)介 廣泛靶向代謝組(Widely Targeted Metabolome):新一代靶向代謝組(Next Generation Metabolome)技術(shù),廣泛靶向代謝組檢測(cè)技術(shù)是一種整合了非靶向和靶向檢測(cè)技術(shù)優(yōu)點(diǎn)的新型代謝組檢測(cè)技術(shù),具有高通量、高靈敏、廣覆蓋相對(duì)定量檢測(cè)代謝物的技術(shù)優(yōu)勢(shì),可以同時(shí)準(zhǔn)確定性定量檢測(cè)近千種(500-1000種)初生和次生代謝物,為解析代謝通路和生物學(xué)機(jī)理研究提供了重要基礎(chǔ)。
物質(zhì)類別,代表性物質(zhì)
黃酮類
槲皮素、木犀草素、芹菜素、橙皮素、甘草素、黃芩素、高車前素、兒茶素等;
酚酸類
異綠原酸,香豆酸,阿魏酸,丹酚酸,丁香素,高香草酸,芥子酸,迷迭香酸,紅景天苷,鼠尾草酸等;
生物堿
石斛堿、咖啡堿、麻黃堿、石蒜堿、苦參堿、甜菜堿、茶堿、葫蘆巴堿等;
萜類
葫蘆素、柴胡皂苷、酸棗仁皂苷、人參皂苷、三七皂苷、異黃芪皂苷、黃芪皂苷、積雪草苷、大豆皂苷等;
維生素類
泛酸、葉酸、維生素ABCDE等;
有機(jī)酸類
紫草酸、延胡索酸、甲基蘋果酸、反式烏頭酸、酒石酸、蘋果酸等;
氨基酸類
苯丙氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、L-苯丙氨酸、脯氨酸、瓜氨酸等;
糖及醇類
D-山梨糖醇、木糖醇、肌醇、D-甘露醇、阿拉伯糖醇、乳糖、麥芽四糖、果糖、蔗糖、葡萄糖等。
脂質(zhì)
溶血磷脂酰乙醇胺、α-亞麻酸、亞油酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、棕櫚油酸、月桂酸、單酰甘油酯等;
應(yīng)用方向:
◆植物生長(zhǎng)發(fā)育研究
◆植物逆境生物學(xué)研究
◆農(nóng)作物農(nóng)藝性狀研究
◆藥用植物活性成分鑒定
◆蔬果花卉營(yíng)養(yǎng)色澤代謝研究
2. 技術(shù)優(yōu)勢(shì):
◆定量準(zhǔn)確:三重四級(jí)桿MRM模式,準(zhǔn)確檢測(cè)物質(zhì)相對(duì)含量,
◆物質(zhì)多、種類全:可與譜圖比對(duì),包括多種物質(zhì),涵蓋多種類代謝物。
3.樣品要求
1.取樣建議
a. 葉片、莖、花等組織,取下后立即放入液氮中速凍2min以上,然后轉(zhuǎn)移到-80℃保存,避免反復(fù)凍融。較大葉片需要用剪刀快速剪碎。
b. 地下組織(根、塊莖等),將分離出的樣本快速用滅菌水清洗,吸水紙吸走多余的水分后,立即放入液氮中速凍2min以上,然后轉(zhuǎn)移到-80℃保存。塊根等組織,需要切成 1-2cm 大小塊狀。
c. 果肉、果皮組織,如果野外現(xiàn)場(chǎng)不具備分離條件,需盡快(30min內(nèi))轉(zhuǎn)移至室內(nèi),低溫條件下將分離果皮或果肉切成 1-2cm 塊狀,立即放入液氮中速凍2min以上,然后轉(zhuǎn)移到-80℃保存。
d. 細(xì)胞樣本,取樣后離心去除培養(yǎng)基,立即放入液氮中速凍2min以上,轉(zhuǎn)移到-80℃保存。
2.混合取樣
取樣時(shí)為了保證樣品的準(zhǔn)確性和減少系統(tǒng)誤差,每份樣品選取 3 株以上長(zhǎng)勢(shì)一致的材料混樣。以水稻葉片為例:取同一時(shí)期,表型基本一致的同一部位1片葉片,同時(shí)取6株,放入10ml離心管中,迅速放入液氮中。
3.樣品量與生物重復(fù)
每份樣品取鮮樣不低于3g,干重不低于1g。
每組至少3個(gè)生物學(xué)重復(fù),準(zhǔn)備備份。
4.儲(chǔ)存與運(yùn)輸
-80℃保存,足量干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。